Abstract
Antigens expressed on the red blood cell (RBC) membrane interact within specific antibodies leading to the formation of erythrocyte agglutinates. Monoclonal antibodies (MAb) show great homogeneity, high affinity and very definite specificity and can be produced in unlimited quantities. The objective of this work was to characterize the behavior of some MAb (anti-A, anti-A1 and anti-H) reacting against RBC of A1, Aint, A2 and Acord phenotypes. Microscopic images of agglutinates were digitized, recorded and processed using a Digital Image Processor. The projected area of each agglutinate was measured and the number of cells contained in each one was calculated. Results expressed as percentages of free and agglutinated cells distributed by area intervals showed that this technique may find differences in the MAb reactivity. Then, the digital image processing of agglutinates appears as a valuable technique to characterize the immunological behavior of MAb.

Key words monoclonal antibodies - digital image analysis - agglutination – erythrocytes


Introducción

Los eritrocitos o glóbulos rojos (GR) son células bicóncavas, anucleadas en su estadio adulto, con un diámetro promedio de 7.5 a 8 micrones. En condiciones de reposo los eritrocitos tienden a apilarse en formaciones cilíndricas típicas denominadas “rouleaux” (Fig.1). Este fenómeno de agregación ocurre in vivo e in vitro, la unión es inespecífica y totalmente reversible en condiciones fisiológicas (1,2, 3).
Los GR expresan antígenos (Ag) proteicos y glicoproteicos pertenecientes a 26 sistemas de grupos sanguíneos descriptos hasta el momento (referencia ISBT). En presencia de un anticuerpo (Ac) específicamente dirigido contra alguno de estos Ag, se produce una reacción de aglutinación. Este fenómeno se desarrolla en dos etapas, la primera es la fijación de las moléculas de Ac sobre los sitios antigénicos, en la segunda etapa, que se da casi simultáneamente, los Ac fijados a una célula toman contacto con sitios antigénicos de otras células, lo que culmina con la formación de una red denominada aglutinado (4,5).

 

Los Ag eritrocitarios de grupos sanguíneos presentan una estructura química determinada y su especificidad resulta de una complementariedad muy estrecha con los sitios de combinación específicos del Ac. El contacto se realiza por fuerzas de interacción intermoleculares no covalentes. La estabilidad de la unión Ag-Ac es función de la exacta complementariedad entre ambos (6,7, 8).

La reacción entre las moléculas de Ac y las de Ag, presentes en la membrana del glóbulo rojo, es específica, reversible sólo in vitro y depende de varios factores:

Si se mantienen constantes todas las variables mencionadas, excepto una de ellas, se puede asumir que los cambios en la aglutinación producida serán función de esa variable.

Desde la década del 80 se han incorporado en la práctica diaria del laboratorio inmunohematológico los anticuerpos monoclonales (AcMo). Éstos son producidos a partir de la fusión de linfocitos B y células de mieloma murino; los hibridomas resultantes tienen la capacidad de producir AcMo específicos a bajo costo y en cantidades ilimitadas. Día a día aparecen en el mercado nuevos AcMo por lo que resulta indispensable evaluar los nuevos reactivos.

La calidad de un reactivo monoclonal se mide por distintos parámetros: la especificidad, ligada a su capacidad de fijarse únicamente sobre su Ag propio, la afinidad, ligada al grado de asociación entre un Ac dado y su Ag específico y la avidez (velocidad de reacción).

El objetivo de este trabajo fue caracterizar el comportamiento de algunos AcMo presentados en el 4th International Workshop on Monoclonal Antibodies against human red blood cells and related antigens (Paris, 2001) frente a eritrocitos (GR) de diferentes subgrupos del grupo A, a través del análisis de las imágenes de aglutinados por procesamiento digital de imágenes.